影音先锋中文字幕无码-精品一区二区三区av天堂-波多野结衣小视频-欧美视频亚洲-性色网站-久久国产中文字幕-麻婆豆传媒一区二区三区-精品乱码一区二区三区-天天狠天天透天干天干-国内精品写真在线观看-国产a√-99国产精品久久不卡毛片-在线免费播放av-日韩福利在线播放-国产无遮挡裸露视频免费-交视频在线播放-国产成人最新三级在线视频-免费三片在线观看网站v888-亚洲偷自拍国综合色帝国-国产一级特黄毛片

細胞樣本根據(jù)目的物所在部位可選擇細胞裂解液或細胞培養(yǎng)上清作為樣本。 需要注意的是： 因該類樣本干擾因素較多， 如細胞狀態(tài)、 細胞數(shù)量(大于 10^6)、ph(約為 7)、培養(yǎng)基鹽離子濃度、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況。

如果目的物是分泌型，主要在胞外，即可選擇細胞培養(yǎng)上清作為樣本，如果目的物主要存在于胞內(nèi)，則建議選擇細胞裂解液作為樣本類型。細胞培養(yǎng)上清處理方法相對簡單，取細胞培養(yǎng)上清，1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可檢測。

細胞裂解液：

1）貼壁細胞需要先用胰酶消化，離心收集細胞（懸浮細胞可直接離心收集） ；

2）將收集到的細胞用冷PBS 洗3次；

3）物理方法裂解細胞（可先超聲破碎細胞，再反復(fù)凍融） ：

       ⇒ 超聲破碎：取適量PBS 重懸細胞，用一定功率的超聲波處理細胞懸液，使細胞急劇震蕩破裂；

       ⇒ 反復(fù)凍融：將待破碎的細胞在-20 度以下冰凍，室溫融解，反復(fù)3次，使細胞溶脹破碎；

4）將標(biāo)本于2-8 度 1500×g 離心 10 分鐘，收集上清備用。

一般情況下，物理方法如反復(fù)凍融，勻漿等方法會比化學(xué)方法好，因為化學(xué)方法會引入酸或堿，可能會對ELISA實驗產(chǎn)生影響。我們也做了相關(guān)實驗來評測化學(xué)提取液和洗滌劑對ELISA檢測的影響，如 RIPA、TritonX-100、NP-40和SDS、脫氧膽酸鈉、β巰基乙醇、DTT 和尿素。根據(jù)我們的質(zhì)檢結(jié)果，高濃度的洗滌劑會影響ELISA檢測的終結(jié)果。然而，其效果會洗滌劑濃度的降低而減少。與其他化學(xué)裂解緩沖液相比，1％的 Triton X-100 和 1％NP-40 對 ELISA檢測的影響較小。如果一定要用化學(xué)提取方法的話，推薦用這兩種洗滌劑來提取靶蛋白。利用化學(xué)的細胞裂解液裂解細胞，如果去污劑成分會干擾抗原抗體反應(yīng)影響檢測效果，推薦利用透析和超濾的方法除去去污劑成分。

處理樣本的過程就是收集目標(biāo)蛋白的過程，由于蛋白容易變性，降解，故該過程應(yīng)盡量溫和。樣本處理之后的儲存也非常重要，尤其注意不要反復(fù)凍融，樣本處理之后可分裝密封保存， 4 度保存應(yīng)小于 1 周，-20 度不應(yīng)超過 1 個月，-80度不應(yīng)超過2個月。在標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫，不應(yīng)加熱使之融解。樣本的處理是實驗成功yi 步, ，以上就是關(guān)于常見樣本處理方法的一個簡述，供研究者參考。